菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)简称蛤仔(下同)，北方称蚬子，南方称花蛤，是我国四大养殖贝类之一。目前关于蛤仔的研究主要集中在养殖技术、遗传育种和养殖生物学^[1]等方面，关于环境因子对蛤仔幼体发育和生长^{[2, 3]}及生理生化^{[4, 5, 6]}等影响的研究也较多。

蛤仔是典型的埋栖贝类，海区投放的苗种规格一般为6—9 mm。苗种投放后能否潜沙及潜沙快慢是放养成败的第一步。潜沙快，蛤仔就能迅速转入埋栖生活，潜沙慢则有可能被水流带走或者被敌害捕食，从而降低蛤仔放养的存活率。众多因素会影响贝类的潜沙过程。国外有关于重金属^{[7, 8, 9]}、有机污染物^[10]等对蛤仔潜沙的影响研究，也有关于温度、盐度、流速、规格和溢油等对其它埋栖贝类潜沙影响的报道^{[11, 12, 13, 14]}；国内有关于魁蚶Scapharca broughtonii^[15]、长竹蛏Solen strictus Gould^[16]和缢蛏Sinonovacula costricta^[17]等潜沙行为的报道。而关于温度、盐度、pH值、流速及规格对蛤仔幼贝潜沙的影响研究国内外未见报道。为此本研究有代表性地选取南方土池育苗所得蛤仔和北方室内人工育苗所得蛤仔，于2011年和2012年就上述因子对蛤仔幼贝潜沙的影响进行了研究，以期为完善蛤仔幼贝的行为学和改进蛤仔养殖技术提供参考。

试验于2011年4月和2012年4月进行。2011年试验用材料为从福建莆田购买的室外土池当年培育的幼贝(以下简称莆田蛤仔)，2012年试验用材料取自辽宁省贝类良种繁育工程技术研究中心，于2011年秋季在辽宁庄河经室内人工繁育并经过越冬的1龄幼贝(以下简称庄河蛤仔)。幼贝在实验室暂养(未铺沙)1周后用于试验。

试验用水为大连黑石礁近岸海区经沉淀的沙滤海水，pH值为8.0—8.3，盐度 30—31，2011年暂养水温为15 ℃，2012年暂养水温为20 ℃。暂养海水水质指标符合渔业水质标准(GB11607-1989)。试验用底质材料取自大连黑石礁海边的泥沙，经40 目筛绢网过滤后用于试验，粒径为0.02—2 mm的沙占94%，沙泥比例约为9∶1，属沙质底质。

试验在2 L的红色塑料桶中进行(流速试验除外)，桶底铺5 cm泥沙，装试验用水2 L，水深约15 cm，试验用幼贝规格为12 mm(规格试验除外)。试验时随机选取20个幼贝用于试验，每个处理设3组重复。水浴控温。试验观察4—5 h后结束。用雷磁PHS-29A精密酸度计测定pH值，用光学折射盐度计测定盐度。

温度、盐度和pH值试验采用两种方法：其一是直接将幼贝从暂养海水中取出放到设定条件下开始试验(以下简称突变试验)；其二是将幼贝在设定条件下暂养24 h后开始试验(以下简称渐变试验)。温度设定为10、15、20、25、30 ℃。用海水中添加充分曝气的自来水将盐度调配为10、15、20、25、30。用HCl和NaOH溶液调节pH值梯度2011年为6.0、7.0、8.0、9.0和10.0，2012年为7.0、7.5、8.0、8.5和9.0。用莆田蛤仔做规格试验，选用幼贝壳长为6、9 mm和12 mm。用庄河蛤仔做流速试验。流速设定为3、4、5 cm/s。方法是调整流速，让试验用水流经一个白色解剖盘，再流经铺有3 cm厚泥沙的另一个相同规格的解剖盘(图 1)，待流速稳定后，投入蛤仔幼贝开始试验。

图 1 流速试验设计示意图 Fig.1 diagrammatic sketch of water flow rate experiment

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潜沙速度用从幼贝落到泥沙表面至贝壳竖起的时间表示。用秒表分别记录蛤仔潜沙的ET₅(5%的受试个体竖壳所用时间)，ET₅₀(50%的受试个体竖壳所用时间)和ET₁₀₀(100%受试个体竖壳所用时间)。以50%潜沙时间(ET₅₀)进行多重比较，作为衡量潜沙快慢，确定适宜范围的标准。用SPSS 17.0软件进行显著性分析，用Excel软件作图。图中突变试验的显著性检验结果用小写英文字母表示，渐变试验的显著性检验结果用大写英文字母表示。

潜沙率(%)=试验结束时完全潜沙的蛤仔数量×100/受试蛤仔数量

静水条件下，在盐度30、水温20 ℃、pH值8.0的天然海水中，壳长12 mm的蛤仔潜沙基本过程包括：闭壳准备、伸出水管及斧足、竖壳、潜沙和潜沙结束等过程(图 2)。

图 2 蛤仔的潜沙过程 Fig.2 The burrowing procedure of Ruditapes Philippinarum

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从落在泥沙表面到刚伸出水管和斧足，时间一般在1—3 min；然后蛤仔张开双壳，缓慢伸出水管及斧足，此阶段需时约3 min；接着蛤仔把斧足伸入沙层内，水管向上，腹缘向下，将壳竖起。之后，蛤仔通过斧足的运动使其左右摆动，摆动一下便下潜一定距离，一般在10次以内便能够全部潜入泥沙中，水管在沙面上留下2个距离很近的小孔，至此潜沙结束。在最适条件下12 mm的蛤仔整个潜沙过程大约需5—10 min。经观察，竖壳是蛤仔潜沙的一个明显标志，健康的幼贝只要壳竖起，就能潜下去，并且先竖壳的基本上先完全潜沙。由于完全潜进沙层的准确时间不好确定，所以在本试验中统一用从蛤仔接触泥沙开始到幼贝竖壳的时间来表示潜沙速度。

蛤仔幼贝的潜沙过程与周玮^[15]等报道的魁蚶苗种潜沙过程相似，但是准备期明显较魁蚶短，魁蚶苗种潜沙准备需要10 min左右，蛤仔幼贝一般1—3 min。有水条件下3.5—7.3 cm的长竹蛏潜沙时间一般在6—12 min^[17]，与蛤仔幼贝相近。试验中发现，蛤仔幼贝的潜沙行为与体质有关，曾经在最佳潜沙条件下(温度20 ℃，盐度30，pH值8.0)观察到个别体质较差的蛤仔(规格12 mm，由低温5 ℃快速升温至20 ℃，足和进出水管伸缩不活跃)竖壳后又倒下的现象，要反复几次才能将壳竖稳，使潜沙时间大大延长，甚至需1 h以上才能完全潜沙。说明蛤仔苗种的体质状况对潜沙有很大影响，选择和购买健康苗种，采取正确的运输方式，保证蛤仔幼贝生理处于良好状态，对苗种投放后的及时潜沙有利。

在设定的10、15、20、25和30 ℃等5个温度梯度条件下，各试验组蛤仔均能100%潜沙。不同温度下蛤仔潜沙的ET₅、ET₅₀和ET₁₀₀见图 3(2011年，莆田蛤仔，暂养水温15 ℃)和图 4(2012年，庄河蛤仔，暂养水温20 ℃)。蛤仔在暂养温度下潜沙最快。以暂养温度为中心向两侧突变时，蛤仔幼贝潜沙的ET₅、ET₅₀和ET₁₀₀均随突变温度的升高或降低而逐渐增大，即潜沙时间逐渐延长。其中对ET₁₀₀影响可以达到显著(P < 0.05，下同)甚至极显著(P < 0.01，下同)水平(图 3和图 4中的ET₁₀₀)。对比突变和渐变的试验结果(图 4)，发现突变时各个温度下的ET₅₀和ET₁₀₀均比渐变时大，ET₅则规律不明显。显著性检验表明，10 ℃和30 ℃时，突变与渐变的ET₅₀差异显著(P < 0.05)，其它条件下的ET₅₀和ET₁₀₀则差异不显著(P＞0.05，下同)。

图 3 温度突变对蛤仔潜沙的影响(2011年，莆田蛤仔，12 mm，暂养水温15 ℃) Fig.3 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with temperature sudden change (Year 2011, Putian clam spat, 12 mm, temporary temperature =15 ℃) 标有不同字母者表示组间差异显著(P < 0.05)，标有相同字母者表示组间差异不显著(P>0.05); ET:有效时间Effective Time; ET5:5%的受试个体竖壳所用时间， ET50:50%的受试个体竖壳所用时间， ET100:100%受试个体竖壳所用时间

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图 4 温度突变和渐变对蛤仔潜沙的影响(2012年，庄河蛤仔，12 mm，暂养水温20 ℃) Fig.4 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with temperature sudden change and gradual change (Year 2012, Zhuanghe clam spat, 12 mm， temporary temperature 20 ℃)

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ET₅₀能较好地消除个体差异对环境因子的不同反应，常用来衡量贝类的潜沙能力^{[7, 8, 10]}。多重比较发现，2011年莆田蛤仔的ET₅₀在15和20 ℃组较低，并且差异不显著(图 3，ET₅₀)，而与其它各组差异显著甚至极显著； 2012年庄河蛤仔的ET₅₀也是以15和20 ℃组最小，并与25和30 ℃组差异显著，但是却与10 ℃组差异不显著(图 4的ET₅₀)。反应出庄河蛤仔潜沙时较莆田蛤仔对低温有较好的适应能力。这种差异可能是因为莆田蛤仔是由温度较高的南方当年繁育所得，而庄河蛤仔是北方繁育并经过越冬后的1龄幼贝，对低温的适应能力更强。

综上所述，在温度10—30 ℃，突变温差5—15 ℃条件下，全部试验组均100%潜沙，并且在15—20 ℃时潜沙最快。说明蛤仔幼贝对温度及其突变的适应能力很强。这可能与蛤仔生长在潮间带，生活环境的温度经常大幅波动有关。对蛤仔幼贝的存活、生长和发育^{[2, 3]}及摄食生理等^{[4, 5]}的研究都反应出蛤仔对温度有很宽泛的适应范围。林笔水等^[3]发现蛤仔稚贝适宜的生长温度为15—30 ℃，最适温度为25 ℃，甚至能忍耐高于35 ℃的水温。

关于温差对贝类潜沙的影响未见报道。本试验结果表明，在暂养温度下潜沙最快(图 3)。经过在受试水温中暂养24 h以后(渐变)，大部分情况下潜沙时间缩短，温差10 ℃时(图 4 ET₅₀中的10 ℃和30 ℃)，蛤仔潜沙的ET₅₀明显小于突变时的ET₅₀(P < 0.05)。说明温度突变会减慢蛤仔的潜沙速度，温差越大越明显。

在设定盐度为10、15、20、25和30等5个梯度组中，观察4—5 h，莆田蛤仔100%潜沙的盐度为15、20、25和30，盐度10组未见潜沙；庄河蛤仔100%潜沙的盐度为25和30，盐度20组潜沙率为20%(突变系列)和30%(渐变系列)，盐度10和15组未见潜沙。显示莆田蛤仔有较强的耐低盐能力。

除去未潜沙的试验组，蛤仔幼贝潜沙时间随盐度的变化情况见图 5和图 6。在能够潜沙的盐度范围内，以盐度30(暂养海水)组潜沙最快。随着盐度的下降，蛤仔的ET₅、ET₅₀和ET₁₀₀值逐渐升高，表现为潜沙速度随盐度的降低而逐渐减慢。若以ET₅₀作为判定指标，莆田蛤仔在盐度30组的ET₅₀与25组差异不显著，与盐度15和20组差异显著(图 5，ET₅₀)，显示最适的潜沙盐度范围为25—30；庄河蛤仔在渐变条件下的最适盐度也为25—30，但突变时最适盐度仅为30(图 6)，显示庄河蛤仔对盐度变化更敏感。渐变系列的潜沙速度多数情况下比突变系列快，但统计分析差异不显著。综合潜沙率和ET₅₀，认为蛤仔潜沙适宜的盐度范围为25—30。

图 5 盐度突变对蛤仔潜沙的影响(2011年，莆田蛤仔，12 mm，暂养海水盐度30—31) Fig.5 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with salinity sudden change (Year 2011, Putian clam spat, 12 mm, temporary salinity 30—31)

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图 6 盐度突变和渐变对蛤仔潜沙的影响(2012年, 庄河蛤仔，12 mm，暂养海水盐度30—31) Fig.6 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with salinity sudden change and gradual change (Year 2012, Zhuanghe clam spat, 12 mm, temporary salinity 30—31)

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与庄河蛤仔比较，莆田蛤仔表现出较强的耐低盐能力，原因可能在于莆田(福建)地区降水量比庄河(辽宁)地区大，海区(特别是近海和潮间带)盐度比庄河低，由于长期适应的结果，使得莆田蛤仔对低盐适应能力比庄河蛤仔强。另外，莆田蛤仔是经室外土池当年育成的幼贝，室外土池多变的生存环境可能导致其耐盐能力增强；庄河幼贝为室内人工培育，且经过越冬了的1龄蛤仔。室内培育环境相对稳定以及越冬期的能量消耗可能使其活力下降，从而对盐度突变更敏感。王军^[18]等人发现盐度23.8—34.8是蛤仔幼体存活的适宜盐度。林笔水等^[3]研究发现稚贝生长的适宜盐度为14.0—33.0，最适盐度是20.5。幼虫变态的适宜盐度在 20.5—33.5之间，盐度在27时幼体的成活率最高。本试验结果显示，来自于南北方的两个蛤仔群体均在盐度30时潜沙最快，可能是对暂养海水盐度适应的结果。宋晓楠等^[6]发现盐度骤降会对菲律宾蛤仔SOD和CAT酶活性，以及鳃丝、肝胰腺、水管和外套膜产生影响，这可能是导致盐度骤降潜沙时间延长的原因之一。

2011年用莆田蛤仔试验(图 7)，设定6、7、8、9、10等5个pH值梯度。受试4—5 h的结果显示，蛤仔在pH值10.0组未见潜沙，在pH值6—9范围内100%潜沙。其中，ET_5、ET₅₀和ET₁₀₀均显示pH值为8.0的试验组潜沙最快，pH值为6.0的试验组潜沙最慢，并且pH值为6的试验组ET₅₀显著高于pH值7、8、9组(P < 0.05)，pH值7、8、9三组的ET₅₀则两两差异不显著。显示幼贝潜沙的最适pH值在7—9之间。2012年用庄河蛤仔进行试验，设定pH值为7.0、7.5、8.0、8.5和9.0，结果见图 8。与莆田蛤仔试验结果相同，受试时间内，各组潜沙率均为100%。但是从ET₅、ET₅₀和ET₁₀₀看出pH值8.0组的蛤仔潜沙最快，并且pH值为8.0组的ET₅、ET₅₀和ET₁₀₀都显著甚至极显著地低于其它各组，显示最佳潜沙pH值为8.0(接近暂养海水的pH值)。

图 7 pH值突变对蛤仔潜沙的影响(2011年，莆田蛤仔，12 mm，暂养海水pH 8.0) Fig.7 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with pH sudden change(Year 2011, Putian clam spat, 12 mm, temporary pH 8.0)

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图 8 pH值突变和渐变对蛤仔潜沙的影响(2012年，庄河蛤仔，12 mm，暂养海水pH 8.0) Fig.8 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with pH sudden change and gradual change(Year 2012, Zhuanghe clam spat, 12 mm, temporary pH 8.0)

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造成福建蛤仔与庄河蛤仔最适潜沙pH值不同的原因可能是福建苗种来自于室外土池，pH值通常较高且有明显的日变化^{[19, 20]}，从而导致幼贝潜沙有较宽的pH值耐受范围，并且在较高pH值条件下(pH值8—9)潜沙较快(图 7中的ET₅₀和ET₁₀₀)。而庄河蛤仔来自工厂化室内育苗，水质pH值相对稳定，所以对pH值更敏感。

pH值渐变时，各试验组的ET₅、ET₅₀和ET₁₀₀均比突变时低(图 8)。平均数差异显著性检验表明，除pH值7.0组以外，其它各pH组渐变时的ET₅₀与突变时差异显著或接近显著(pH值8.5时，P=0.072),说明0.5及以上的pH突变对幼贝潜沙产生了明显影响。

一般认为pH值 6.5—8.0的天然水属中性水^[19]，pH值5—6.5为弱酸性，pH值8—10为弱碱性。综合来看，蛤仔幼贝在6—9的pH值范围内均能100%潜沙，并且在偏弱碱性环境中(pH值 8—8.5)潜沙速度较快(图 7，图 8)。桑士田等^[21]利用响应面分析法得到蛤仔稚贝((3.33±0.06)mm)在pH值 8—9时生长最好，与本试验结果较吻合。

试验设定了3、4、5 cm/s三个流速。结果表明蛤仔幼贝潜沙速度随流速的增加而加快(图 9)，其中5 cm/s组的ET₅、ET₅₀和ET₁₀₀均与3 cm/s组的差异显著(P < 0.05)，并且5 cm/s组的ET₅₀与4 cm/s组差异显著，其它两组差异不显著(P>0.05)。Sakurai等^[14]发现北极贝Pseudocardium sachalinensis的潜沙速度随着流速的增加而增加，St-Onge等^[12]发现，水流速度 < 24 cm/s 时，随着流速的增加沙海螂Mya arenaria开始潜沙(MPI)的数量增加。说明一定的流速会促进贝类更快地潜沙可能是普遍存在的现象。

图 9 流速对蛤仔潜沙的影响(2012年，庄河蛤仔，12 mm，20 ℃，盐度30) Fig.9 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with different water flow rate (Year 2012, Zhuanghe clam spat, 12 mm, 20 ℃, salinity 30)

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在6—12 mm范围内，随着蛤仔规格的增大，潜沙用时减少(图 10)。在盐度30、温度15，pH值 8.0条件下，12 mm的ET₅和ET₅₀与6 mm、9 mm组差异显著(P < 0.05)，6 mm与9 mm的差异不显著；而ET₁₀₀则两两差异显著(P < 0.05)。不同学者在研究规格对不同贝类潜沙影响时所得结论不同。周玮^[15]等研究表明，壳长在1.5—3.0 cm范围内，较大的魁蚶苗种完成潜沙的时间最短，与本试验结果一致。但是St-Onge等^[12]发现随着壳长的增加砂海螂幼贝开始潜沙(MPI)或完成潜沙(MPC)的平均比例减少。John^[13]等研究一种河口贝类(Villorita cyprinoides)的潜沙行为时发现幼贝(2.0 和2.4 cm)比成贝(3.0 和 3.9 cm)的潜入速度更快。孙虎山^[17]发现3.5—7.3 cm的长竹蛏随规格增大潜沙速度减慢。不同种类以及同种不同发育阶段的贝类，运动方式和生活习性的不同可能是导致上述差异的主要原因。目前生产上海区投放的蛤仔苗种一般为6—9 mm，从本试验结果看，投放更大规格(10 mm以上)苗种将有利于蛤仔快速潜沙，提高放苗存活率。

图 10 不同规格对蛤仔潜沙的影响(2011年，莆田幼贝，15 ℃， 盐度30) Fig.10 The effect on burrowing in Ruditapes Philippinarum with different size (Year 2011, Putian clam spat, 15 ℃, salinity 30)

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综上所述，沙质底质条件下，蛤仔幼贝在水温10—30 ℃、盐度25—30、pH值 6.0—9.0、流速3—5 cm/s及壳长6—12 mm规格范围内，均能100%潜沙，并在水温为15—20 ℃、盐度为25—30、pH值为8.0—8.5、流速为5 cm/s(3—5 cm/s范围内)、规格为12 mm时潜沙速度最快(6—12 mm范围内)。最适条件下，12 mm的幼贝3—5 min就潜沙完毕。温度、盐度和pH值突变会使潜沙速度减慢，甚至不潜沙。室外土池育苗所得苗种(莆田蛤仔)比室内人工育苗所得苗种(庄河蛤仔)对温度、盐度和pH值突变的适应能力强。

在生产上底播苗种时，注意购买地或暂养海区与投放海区环境因子的差异，适时测定温度、盐度、pH值等理化指标，了解海区水文状况，选择较大规格和健康的苗种放养，将对加速蛤仔潜沙提高放养成活率有利。考虑到环境突变的不良刺激，幼贝实际的最适潜沙温度、盐度和pH值应该比试验所得更宽泛。本文为蛤仔的潜沙行为学提供了理论基础，为蛤仔养殖产业快速稳步发展提供了实践经验。